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食用菌基础知识和基本技术
编辑:jtdnyw 作者:本站 六安市金土地农业科普示范园


    食用菌是集“天然、营养、保健”于一体的优秀绿色食品;又是利用秸杆、净化环境、投资少、见效快,少用耕地,立体栽培,高效生产的生态工程;而且消费量大,国内外市场广阔,是21世纪具有发展前景的生物产业。
 为了更快更好地发展我县食用菌生产,让有志发展食用菌事业的城乡专业户和农技员能尽快地掌握这门实用技术,依靠科技走勤劳致富之路,特编写这份简要资料,供初学者参考。
一、食用菌的栽培价值
    食用菌是指可供食用的大型真菌,如磨菇、香菇、草菇、平菇、木耳、灵芝、猴头等,它们与植物不同,没有叶绿素,不能利用光合作用形成营养物质,而是靠腐生或寄生方式生存。我国已知食用菌不少于850种,能够人工栽培超过60种,有生产规模的有20多种。
 1、营养价值:
    食用菌营养丰富、味道鲜美,被誉为“山珍”。一般含蛋白质(鲜菇)4%左右,比蔬菜、水果的含量高4-12倍。一斤干菇蛋白质含量20-25%,相当于2斤瘦肉,3斤鸡蛋,12斤牛奶的含量。而且含有人体必需的8种氨基酸、维生素、矿质元素都很丰富。
2、药用价值:
食用菌中含甾类、三萜类、有锗和多糖体对调节人体机能,提高免疫力、抗肿瘤、降血压、降血脂和胆固醇、抗病毒、延年益寿、抗衰老都有显著效果,是一种保健食品。
 3、生态价值:
 食用菌能直接利用农作物秸杆中的纤维素、半纤维素、木质素转化为人类可食用菌的蛋白质。全世界每年可生产2000亿吨有物,但只有1%的是淀粉、脂肪、蛋白质,绝大多数都是纤维、木质素等,如果利用食用菌来转化,可以支持10倍以上人口的生存,而且减少污染,促进生态平衡,是二维农业(植物、动物)向三维农业(动物、植物、微生物)发展的重要内容。
 二、种菌致富的有利因素
 据有关部门统计:1986年我国食用菌年总产58.5万吨;1994年为264.09万吨;2000年超过450万吨,预计到2010年发展到600万吨以上,成为世界强国,这是我国农村地区发展经济的支柱产业,也是农民致富的好门路。
 1、原料多,成本低,投资少。稻草、木屑、玉米芯、豆秸、棉子壳等秸秆,以及麦麸、米糠、畜禽粪,都是长菇的优质原料,所需器材罐瓶,塑料袋等也很平常;场地要求不严,空余房屋、大棚、树林、家前屋后都可发展;一般说二、三百元就可上马,一两千元就可办一个象样的菇房。
 2、生产周期短,见效快。长菇与栽培其他作物和养殖相比,见效快。从播种到采菇,草菇只需10-12天;平菇25天;金针菇30天;猴头菇40天;香菇60-70天;在生产中可根据各品种对温度的不同需求,搭配利用,四季长菇,月月销售,经济效益更好。
 3、操作简便,劳力不强,技术易学。长菇并非深不可测,高不可攀的项目。只要认真、细心、严格,经过5-7天实际操作训练,均可学会1-2种菇的制种栽培技术。
 4、产量高,效益好,易销售。一般说每公斤原料可产鲜菇1.5-2.5公斤,其中草菇产量低,平菇产量高。若一个家庭年投料5000公斤,一般产菇7000公斤以上,年收入1.5-2万元,这是通常的情况。至于长什么菇-赚钱,必须根据生产季节、自然资源、消费习惯、市场行情和技术能力而定,有一个发展和壮大的过程,一般说长菇效益为1:1.5-2.5。
三、食用菌对环境条件要求
   食用菌生长发育所需的环境条件主要是营养、温度、水分、空气、光线、酸碱度等因素。
    1、营养:一般有腐生、共生、兼性寄生三种类型。
①腐生类型:分解枯草枯木获取营养,如草菇、平菇、香菇等。
②共生类型:必须在活的树木上生长,如松口蘑、牛肝菌。
 ③兼性寄生类型:如蜜环菌,既能在枯木上生长,又能侵入到天麻中生长。
    营养物质主要是:碳原:纤维、木质素、淀粉、糖等,在酸的作用下分解供食用菌吸收。
氮 原:来源于蛋白质、氨基酸、尿素、氨、硝酸盐等。
无机盐:其中以磷、钾、镁元素-重要。
    2、温度:食用菌一生对温度分三个阶段要求:
    ①菌丝体生长阶段,绝大多数的食用菌菌丝体生长范围是5-33℃,适温为20-25℃,一般菌丝体不耐高温,但草菇在40度生长良好。
    ②子实体分化阶段:一般比菌丝体低一些。
  分为低温型:-适温度18度以下,如平菇、香菇等;秋季、冬季、初春出菇。中温型:-适温度20-24度,如鸡腿菇、银耳等,多在春秋出菇。高温型:-适温度24度以上,如草菇、高温平菇多在夏季生产。
    ③子实体发育阶段:比菌丝体要高些,但比分化阶段要低些。
    3、水分:培养料含水量十分重要,栽培过程中,空气湿度也很关键。
培养料含水量一般为60%左右,空气湿度一般为85-95%。
     4、空气:食用菌属好气性真菌,一定要满足通气条件。
     5、光线:一般都在遮光条件下栽培,发菌需黑暗条件,子实体发育需散射光,否则出现畸型菇。
     6、酸碱度:(PH值)
     绝大多数食用菌喜酸性环境,菌丝生长PH值-适为5-5.5,大于8则受到影响。由于灭菌和料易酸化的关系,配料时,培养基应略高于菌丝需要值。
 四、食用菌生产的基本设备 
     食用菌生产包括制种和栽培。制种设备较多,由简到繁,由粗到精,直至系列化、现代化生产,有一个发展过程;栽培需场所和菇房,也有一个规模和规程,都需要逐步投资和发展。
     1、灭菌锅:有高压灭菌锅和常压灭菌灶两种。高压灭菌在1.1公斤/厘米2压力下灭菌30分钟,可杀死斜面试管中的杂菌;在1.5公斤/厘米2压力下灭菌1小时,可杀死蘑菇瓶中棉子壳、木屑等培养料中杂菌。有条件可购置手提式医用消毒锅,一次可消毒50-60支试管或10只蘑菇瓶。常压灭菌灶:是用砖块水泥制成,蒸锅上放消毒物,只需把水烧开并保持6-8小时;停火后再焖1-2小时;一般做为生产种消毒使用。
目前简易消毒有采用蒸笼间隙消毒,把水烧开并保持1-1.5小时,停火降温30分钟,再用大火烧开并保持1-1.5小时,消毒即可完成。微波炉消毒可用中高档,开10分钟时间消毒就可完成,也可采取间隙消毒法。
 2、接种箱:一切菌种转接、分离、扩繁都需在接种箱中进行;要求封闭严密,便于操作。一般简易接种箱高50厘米,宽47厘米,长82厘米;在长的一侧上方安装一块30×32厘米玻璃,以便观察,下方留两个直径为14厘米的洞口,洞口上装33厘米长的布袖套,袖口用松紧带扎牢。箱内装灯,有条件再装一支紫外线灯。现在大面积生产上常采用开放式接种,这就需要购置一台接种器,在无菌风区域内接种。
     3、恒温箱:有专制的,也有土制地,土制的木箱可用双层板,内填木屑保温,箱内装几种规格灯泡,进行调节。现在也有用烘箱进行改制,一般保温效果也很好。
 4、培养室:要求干燥、清洁、通风、有散射光,菌种入室前要消毒,室内应备有多层培养架,也需加温炉,铁皮管导出室外,以便排气。夏季要有风扇,便于降温。
 5、制种用具
    天平: 500克的普通天平
    量杯: 用来计量水的体积有500、1000毫升两种
    试管:一般采用20×200毫米规格
    小漏斗:
    菌种瓶:
    菌种袋:耐高温的聚内烯薄膜,规格另种
    酒精灯:
    接种刀、铲、针、镊子、棉花、纱布等。
  6、消毒药物:甲醛:用于空间熏蒸消毒,每立方米需2毫升
 高锰酸钾:配成0.1%溶液,用于材料表面消毒,也可5克高锰酸钾加10毫升甲醛混合熏蒸消毒。
 新洁尔灭、漂白粉、多菌灵、石灰等都是常备消毒物品。
  7、菇棚建设:
  菇棚的建设,基本要求能遮阳,保持棚内三分阳,七分阴,只能散射光,不能直射阳光;其次能通风换气,有出气孔,同是能保温保湿,便于操作管理和采收。主要形式有:
  1、塑料小地棚:拱园形塑料小地棚一般宽1.0-1.5米,应根据菇床宽度来定。棚架用细竹竿或毛竹片,相互间距为0.3-0.6米,其上覆盖薄膜,小地棚有很好的增温保湿作用,是室外简易菇棚的一种。
  2、半地坑式大棚:半地坑式大棚是因地制宜、因陋就简设计的较为适用的大棚,主要结构和特点是:⑴东西或南北走向都可以,一般长50米,宽6米,中间两肋用竹竿撑起,上用竹或竹片弓成弧形。⑵四周用土垛墙,棚内地面下挖30公分左右,四周围墙高50公分左右,中间起脊棚高2米左右。⑶用铁丝加固骨架,上盖农膜,四周用土压实,上盖稻草遮阴。这种棚造价低廉,保温保湿,散射光均匀,通风性能良好,操作也方便。
  3、日光温室:这是一种利用日光作为能源的温室,其保温性能好,一般比外界高10℃以上,且温差变幅也不大,它的后墙有土墙或双层砖砌成,前面由支柱、横梁等构成,棚面复盖薄膜和草帘,后墙要留通风口。
 此外还有钢架大棚,栽培面积大、增温快,但必需要加层遮阳网,冬季还要覆盖草帘,才能保温。
五、食用菌生产基本技术
(一)三级菌种的培育
   用于生产的菌种一般要经过三个步骤。母种(一级试管种)的培养扩凡——原种(二级广口瓶种)的生产——栽培种(三级菌袋种)的生产。
  1、母种的培养:从孢子分离或组织分离得到的纯菌种,在生产上叫母种。培养母种时,应根据不同食用菌菌丝所必须的生长条件选择合适的培养基,进行扩大培养。⑴马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA培养基),⑵马铃薯、蔗糖、琼脂培养基(PSA培养基)。
  配制方法:将马铃薯洗净去皮,称200克,加水1000毫升,煮沸20分钟左右;用纱布过沪去渣,在汁液中加20克琼脂和25克白糖,加热溶化,再补足水分至1000毫升,煮沸后趁热分装试管。后经高压消毒,成斜面培养基,接种培养,成母种。
  2、原种和栽培种的生产:将试管中培养好的母种分割成4-6块,移接到棉籽壳、木屑或粪草等广口瓶培养基中,经过恒温培养得到的菌种叫原种。把原种转接到同一培养基上进行扩大培育,用于生产上的菌种为栽培种。一般一支母种试管接5瓶原种,一瓶原种接成10袋生产种。原种和栽培种在培养期间,要掌握温度、湿度,还要经常检查,注意透气,防止阳光直射,防止杂菌污染。
    原种麦粒培养基:麦粒1000克
    石膏 2克
    碳酸钙 5克
    水 1500毫升
    先把小麦粒浸3-5小时,加热煮沸15分钟,麦粒发亮不烂,过沪晾干,拌石膏碳酸钙。
    熟料栽培种培养基:棉子壳 50%
    木屑 30%
    麸皮 18%
    石膏 1%
    糖 1%
(二)四季育菇的季节安排
 要根据不同菇类品种对温度的要求,结合本地气候状况,选择安排制种期、播种期,以求得-佳的出菇期,获得更高产量。
 根据不同食用菌在子实体分化阶段对温度的反映,可将它们分为三大类型。
 1、低温型:子 实体分化-高温度24℃以下,-适温度在20℃以下,如平菇、蘑菇、香菇、金针菇、猴头菇等。一般都在9月制生产种,10月份播种,秋、冬、春三季生产、出菇。
 2、中温型:子实体分化-高温度在28℃以下,-适温度在22-24℃,如木耳、银耳、鸡腿菇(中温偏低)等。一般在8月中旬制种,9月中下旬播种,秋季生产出菇,也可春季生产。
 3、高温型:子实体分化-高温度在30℃以上,-适温度在24℃以上,以草菇为代表,大肥菇(高温蘑菇),鲍鱼菇(高温平菇、台湾平菇)。一般在5-6月制生产种,7-9月生产出菇。
(三)培养料的调制原则
 培养料的配方是指在制作培养基时采用主要原料和辅料的种类及其数量的配比,要根据不同菇种要求和充分利用本地资源而定。一个较合理、科学的配方必须具备营养性、透气性、持水性三个条件来决定,只有这样才能使菌种发菌快,菌丝旺盛,产量高,品质好。
 ⑴营养性:食用菌在营养生长和生殖生长都需要大量的碳源、氮源、无机盐类和生长素,在一般情况下,碳源的吸收利用率为25%,碳源不足,菌丝容易早衰。氮源不足菌丝生长弱、且又缓慢、氮源过量,菌丝过旺、不利积累代谢产物。一般食用菌在营养生长阶段碳氮比以20:1左右为好;在子实体发育阶段以40:1左右为好。调节补充碳源辅料主要是糖分,补充氮源的辅料主要是麸皮、豆饼、米糠、二铵、尿素。
⑵透气性:若在配方中加入质地细密、透气性差的原料多,菌丝体在生长阶段就会积累较多的二氧化碳和有害气体,会抑制生长,甚至死亡,透气性好的培养基,菌丝旺盛、子实体壮实。
⑶持水性:保持水分较好的原料,能够充分满足菌丝及子实体对水分的需求和营养成分的吸收,减少喷水和保持培养料内的营养成份。否则出现菌丝体或子实体因没有及时补充水源而干枯,停止生长发育。持水性能较好的培养基原料有麦秸、玉米等。作物秸杆的营养与棉子壳相比,没有棉子壳好,所以要尽量配置复合培养基(几种秸杆混合配制)尽量不使用单一秸秆,以防止营养缺乏或者单一。豆秸、玉米心混合丰富、透气好,但持水性差;豆秸营养丰富,处理好透气性差,持水性好;麦秸、稻草营养一般,但透气性好,持水性差,木屑富含碳素,持水性好,透气性差,在配制时,既要充分利用废弃的农作物秸秆,又要考虑几种原料,采取优势互补的原则,进行组合配比,这样配制出的混合培养基具有营养丰富、透气性强、持水性好,能够充分满足菌丝体的子实体生长发育。
(四)食用菌生产减少染菌污染的措施
发展食用菌生产控制杂菌污染是一个非常重要的环节。所谓杂菌就是指在培养基上生长的、非特定培养的食用菌之外的一切抑制或防碍食用菌正常生长的微生物,统称为杂菌。一般减少杂菌污染主要措施:
1、成团、结块的培养料要打碎、培养料要先发酵或石灰水处理。
 2、母种、原种培养棉塞不能吸湿污染,松紧要适中,过松易进杂菌。
3、高压灭菌要注意要压力、温度、时间关系。要掌握好二次排气,母种试管灭菌不低于半小时,原种不少于1小时。常压灭菌达计时温度后不少于10小时。
4、接种时一定要严格按无菌操作要求进行,不能减少程序,尽可能减少污染源。
5、培养室要通风干燥、及时消毒。
6、防止杂菌污染应贯彻预防为主,药物为辅的方针,才能减少污染,提高产量,降低成本,改善品质,保障食用者的安全和健康。
7、常见的杂菌:高温季节常见链孢霉(红色面包霉),绿色木霉,初期为白色,后变绿色,根霉初为白色,后变灰白色到黑色;青霉菌丝呈扫帚状,还有曲霉、毛霉和鬼伞类杂菌。防止的根本办法在于每个环节严格操作,发病后及时发现,采取措施,防止扩散传播为害,
六:食用菌菌种生产技术规程
前 言
食用菌菌种生产技术是否规范直接影响菌种的质量,从而影响食用菌产品的质量。我国食用菌菌种生产采用母种、原种、栽培种的三级繁育程序。为了实现食用菌菌种生产技术规范化,确保菌种质量,维护菌种生产者、经营者和使用者的合法权益,特制定本标准。
本标准的附录A、附录B均为规范性附录。
本标准由农业部种植业管理司提出。
本标准起草单位:中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心、中国农业科学院土壤肥料研究所、农业部食用菌产品质量监督检验测试中心(上海)。
本标准主要起草人:张金霞、贾身茂、王南、左雪梅、申进文.
食用菌菌种生产技术规程
1. 范围
本标准规定了各种食用菌各级菌种生产的生产场地、厂房设置和布局、设备设施、使用品种、生产工艺流程、技术要求和贮存运输要求。
本标准适用于各种各级食用菌苗种生产。
2. 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的-新版本。凡是不注日期的引用文件,其-新版本适用于本标准。
GB 4789.28---1994 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
GB 9387--1988 食品包装用聚乙烯成型品卫生标准
GB 9688—1988 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准
3. 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。
3.1 品种strain
经各种方法分离、诱变、杂交、筛选而选育出来具特异性、均一(一致)性和稳定性的具有同一个祖先的群体。也常称作菌株或品系。
3.2菌种pure cu]ture
经人工培养并可供进一步繁殂或栽培使用的食用菌苗丝纯培养物,包括母种、原种乳栽培种。
3.3母种 stock culture
经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物,以玻璃试管为培养容器和单位,也称一级种、试管种。
3.4原种pre-culture spawn
由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑科菌种瓶或15 cm×28 cm聚塑料袋为容器.
3.5栽培种spawn由原种移植、扩大培养而虐的苗丝体纯培养物。常以玻璃瓶、塑料瓶或塑料袋为容器.栽培种只能栽培,不可再次扩大繁殖菌种。
3.6 种木wood-pieces
木塞种用的一定形状和大小的木质颗粒,也称种粒。
3.7 固体培养基solid medium
以富含木质纤维素或淀粉类天然默源物质为主要原;抖,填加适量白勺有氮源朽无机盐类,具一定水分含量的培养基。常用的主要原料有;木屑、棉籽壳、秸秆、麦粒、谷粒、玉米粒等,常用的有氮源有麦麸、米糠等,常用的无机盐类有硫骏钙、硫兹镁、磷酸二氢钾等。固体培养基包括以阔叶树木屑为主要原料的木屑培养基、以草本植物为主要原料的草料培养基、以禾谷类种子为主要原料的谷粒培养基、以腐热料为原料的粪草培养基,以种木为主要原料的木塞培养基。
3.8 种性 characters of strain
食用菌的品种:痔性,是鉴别食用聾菌种或品种优劣的重要标准之一。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求,抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺性状.
4.技术要求
4.1 技术人员 菌种厂应有与菌种生产所需的相应专业技术人员.
4.2 场地选择
4.2.1基本要求 地势高燥,通风良好。排水畅通,交通便利。
4.2.2 环境卫生要求
至少300m之内无禽畜舍,无垃圾(粪便)场,无污水和其他污染源(如大量扬尘的水泥厂、砖瓦厂、石灰厂、木材加工厂等)。
4.3 厂房设置和布局
4.3.1 厂房设置和建造
有各自隔离的摊硒场、原材料库、配料分装室(场)、灭菌室、冷却室、按种室、培养室、贮存宣、菌种检验室等。厂房建造从结构和功能上满足食用菌菌种生产的基本需要。
4.3.1.1 摊晒场 .
要求平坦高燥、通风良好,光照充足、空旷宽阔。远离火源.
4.3.1.2 原材料库 要求高燥、通风良好,防雨,远离火源。
4.3.1.3 配料分装室(场) .
要求水电方便,空间充足。如安排在室外,应有天棚,防雨防晒.
4.3.1.4 灭菌室
要求水电安全方便,通风良好,空间充足,散热畅通。
4.3.1.5 冷却室 洁净、防尘、易散热。
4.3.1.6 接种室
要设缓冲间,防尘换气性能良好,内壁和屋顶光滑,经常清洗和消毒。做到空气洁净.
4.3.1.7 培养室和贮存室
内壁和屋顶光滑,便于清洗和消毒。培养室和贮存室墙壁要加厚,利于控温.
4.3.1.8 菌种检验室 水电方便,利于装备相应的检验设备和仪器.
4.3.2布局 应按菌种生产工艺流程合理安排布局。
4.4 设备设施
4.4.1 基本设备 磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、净化工作台、接种箱、凋温设备、除湿机、培养架、恒温箱、冰箱、显微镜等及常规用具,产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装瓶装袋机.高压灭菌锅应使用经有关部门检验的安全合格产品。
4.4.2 基本设施
配料、分装、灭菌、冷却、接种.培养等各环节的设施规模要配套。冷却室、按种室、培养室和贮存室都要有调温设施。
4.5 使用品种
4.5.1 品种
应使用经省级以上农作物品种审定委员会登记的品种,并且清楚种性。不应使用来源和种性不清的菌种和生产性状未经系统试验验证的组织分离物作种源生产菌种。并从具相应技术资质的供种单位引种。
4.5.2 移植扩大
母种仅用于移植扩大原种,一支母种移植扩大原种不应超过6瓶(袋);一瓶原种移植扩大栽培种不应超过50瓶(袋)。
4.6 生产工艺流程
培养基配制→分装→灭菌→冷却→接种→培养(检查)→成品
4.7 生产过程中的技术要求
4.7.1 容器
4.7.1.1 母种
使用玻璃试管和棉塞,试管18 mm×180 mm.1或20mm×200mm,棉主要使用梳棉,不应使用脱脂棉。
 4.7.1.2 原种
使用650 mL-750 ml,耐126℃高温的五色或近五色的玻璃茵种瓶,或850 ml耐126℃高温白色半透明符合GB 9687卫生规定的塑料菌种瓶,或15cm×28cm耐126℃高温符合GB 9688卫生规定的聚丙烯塑料袋.各类容器部应使用棉塞,棉塞应符合4.7.1.1规定;也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。
4.7.1.3 栽培种
使用符合4.7.1.2规定的容器,也可使用≤17 cm×35 cm耐126℃高溫符合GB 9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。各类容器都应使用棉塞或无棉塑料盖,并符合4.7.1.2规定。
4.7.2 培养原料
4.7.2.1 化学试剂类
这类原料如硫酸镁、矿酸二氢钾等,要使用化学纯级试剂。
4.7.2.2 生物制剂和天然材料类
生物制剂如酵母粉和蛋白胨,天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等,要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净;干燥。
4.7.3培养基配方
4.7.3.1 母种培养基 一般使用附录A中第A.1章规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)或第A.2章规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基(CPDA),特殊种类需加入其生长所需特殊物质,如酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等,但不应过富。严格掌握PH值。
4.7.3.2 原种和栽培种培养基
根据当地原料资源和所生产品种的要求,使用适宜的培养基配方(见附录B),严格掌握含水量和PH值。
4.7.4 分装
母种培养基的分装量掌握在试管长度的四分之一至五分之一,灭菌后摆放成的斜面顶端距试管口不少于50mm,原种和栽培种培养基装至距瓶(袋)口不少于60 mm,灭菌后不少于45 mm。棉塞大小松紧要适度。原种和栽培种培养基的松紧度要一致。
4.7.5 灭菌
母种的培养基配制分装后应立即灭菌;原种和栽培种培养基配制后应在4 h内进锅灭菌。母种培养基灭菌0.11 Mpa—0.12 Mpa,30min,木屑培养基和草料培养基灭菌0.12 MPa,1.5 h或0.14 MPa—0.15 MPa,1h,谷粒培养基、粪草培养基和木塞培养基灭菌0.14 MPa—0.15 MPa,2.5 h。装容量较大时,灭菌时间要适当延长。灭菌完毕后,应自然降压,不应强制降压.常压灭菌时,在2 h之内使灭菌室温度达到100℃,保持100℃8 h—lO h。母种培养基、原种培养基、谷粒培养基、粪草培弃基和木塞培养基,应高压灭菌,不应常压灭菌。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。
4.7.6 灭菌效果的检查
母种培养基置于28℃恒温培养,原种和栽培种培养基经无菌操作接种于GB 4789.28--1994中  4.8规定的营养肉汤培养基中,于28℃恒温培养,48 h后检查,无微生物长出的为灭菌合格。
4.7.7 冷却
冷却室使用前要进行清洁和除尘处理。地面铺消毒过的塑料薄膜后,将灭菌后的原种瓶(袋)或栽培种瓶(袋)放置在冷却室中冷却到料温降至适宜温度。
4.7.8 接种
4.7.8.1 接种室(箱)的基本处理程序
清洁→搬入接种物和被接种物→接种室(箱)的消毒处理。
4.7.8.2 接种室(箱)的消毒方法
用药物消毒并用紫外灯照射.
4.7.8.3 净化工作台的消毒处理方法
先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒,然后预净20min.
4.7.8.4 接种操作:在无菌室(箱)或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时贴好标签。
4.7.8.5 接种室(箱)后处理
接种室每次使用后,要及时清理清洁,排除废气清除废物,台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦试消毒。
4.7.9培养室处理:在使用培养室的前两天,采用药物消毒。
4.7.10培养条件
根据培养物的不同生长要求,给予其适宜的培养温度(多在22℃--28℃),保持空气相对湿度在 %以下,通风,避光。
4.7.11培养期的检查
各级菌种培养期间应定期检查,及时拣出不合格菌种.
4.7.12入库 完成培养的菌种要及时登记入库。
4.7.13记录 生产各环节应详细记录。
4.7.14 留样
各级菌种都应留样备查,留样的数量应以每个批号母种3—5支,原种和栽培种5—7瓶(袋),于4℃--6℃下贮存,贮存至使用者在正常生产条件下该批菌种出第一潮菇(耳)。
附录A
(规范性附录)
母种常用培养甚及其配方
A.1 FDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)
马铃薯200 g(用浸出汁),葡萄糖20g,琼脂20g,水1000mL,PH值自然。
A.2 CPDA培养基(综台马铃薯葡萄糖琼脂培养基)
马铃薯200g(用浸出汁),葡萄糖20g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁o.5g,琼脂20g,水1000 mL,pH值自然。
附 录 B
(规范性附录)
原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类
B.1 以木屑为主料的培养基配方
见B.1.1、B.1.2、B.1.3,适用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金计菇、滑菇、鸡腿菇、真姬菇等多数木腐菌类。
B.1.1 阔叶树木屑78%,麸皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%士2%。
B.1.2 阔叶树木屑63%,棉籽壳15%,麸皮20%,糖l%,石膏l%,含水量58%土2%。 B.1.3 阔叶树木屑63%,玉米芯粉15%,麸皮20%,糖l%,石膏1%,含水量58%土2%
B.2 以棉籽壳为主料的培养基
见B.2.1、B.2.2、B.2.3、B.2.4,适用于黑木耳、毛木耳、金针菇、滑菇、真姬菇、杨树菇、鸡腿菇、侧耳属等多数木腐菌类.
B.2.1 棉籽壳99%,石膏l%,含水量60%土2%。
B.2.2 棉籽壳84%一89%,麦麸l0一15%,石膏1%,含水量60士2%。
B.2.3 棉籽壳54一69%,玉米芯20%一30%,麦麸lO—15%,石膏1%,含水量60土2%。
B.2.4 棉籽壳54%一69%,阔叶树木屑20--30%,麦麸10—15%,石膏1%,含水量60%士2%。
B.3 以棉籽壳或稻草为主的培养基
见B3.1、B3.2、B.3.3适用于草菇。
B.3.1 棉籽壳99%,石灰1%,含水量68土2%。
B.3.2 棉籽壳84—89%,麦麸10—15%,石灰1%,含水量68土2%。
B.3.3 棉籽壳44%,碎稻草40%,麦麸15%,石灰1%,含水量68土2%。
B.4 腐熟料培养基
适用于双孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇属的种类。
B.4.1 腐熟麦秸或稻草(干)77%,腐熟牛粪粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量62土1%,PH7.5。
B.4.2 腐熟棉籽壳(干)97%,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量55土1%,PH7.5。
B.5 谷粒培养基
小麦、谷子、玉米或高梁97一98%,石膏2一3%,含水量50±1%,适用于双孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇属的种类,也可用于侧耳属各种和金针菇的原种。
B.6 以种木为主料的培养基
阔叶木种木70--75%,附录B.l.l配方的培养基25%一30%.
七:菌种的脱毒生产技术
(1)脱毒菌种的应用优势及前景
所谓脱毒,原意是指采用技术手段或措施,将种苗自身携带的病毒、病菌分离出使菌种纯化。但在食用菌菌种的脱毒技术研究中,我们在遵偱脱毒操作规程的基础上,通过改变培养基质,有意创造高温、低温以及一系列的不适条件等若干技术手段,迫使菌种的菌丝在恶劣条件下生存、生长,借以恢复其“野性”,同时提高了菌种的抗逆性,大大增强了菌种的抗病性能,脱毒菌种的应用优势主要体现在一下几个方面:
菌种恢复了原有的生物特性。近几年来不断有菇农反应,“原来种的挺好的品种现在不行了,发病多了,产量太低了”,或者“买的是黑色品种,种出来成了白的”等等。笔者认为,菌种自身携带的病毒、病菌是重要原因之一。将该菌种进行脱毒处理后,即可恢复原有生物特性:黑色的就是黑色,白色的又还原为白色,是什么温度型就是什么温度型,是什么性状就是什么性状,与刚刚培育处来的菌种(种源)特性完全相符。
菌种自身适应性、抗逆性大大增强。由于在脱毒操作过程中采用了若干技术手段,比如培养基质的富养贫瘠不断交替,培养培养温度的高低变换等,使菌株在恢复其“野性”基础上,增强了对基质的分解能力、转换能力,对高温条件的适应能力以及对低温条件的抵抗能力等,故而在生产应用中表出脱毒后的高抗性。以“黑平119”为例,尽管该菌株可在2℃~32℃条件下出菇,但经连续生产后,当气温达到30℃时即表现出菌盖薄、小、脆以及产量极低的不理想状况,严重时25℃下难以出菇。经脱毒处理后,      其在33℃高温条件下仍能产出色深朵大、菌盖较厚的鲜菇,产量较未脱毒的菌种高出80%以上。                         
由于抗性的提高,栽培发病率大大下降。多年来,食用菌栽培生产中的病害发生率一直居高不下,个别菇农曾连续数年来只能收获第一潮菇,此后菌袋便不在出菇,或者第二潮菇变黄、萎缩、死亡。据调研分析,近年发生的病害多为褐斑病、皇腐病等,但在脱毒菌种的应用生产中至今未发现有上述病害发生。
由于使用脱毒菌种,生产中的病害发生率下降,除可相应提高产菇数量外,还可以减少药物的使用从而降低费用。食用菌产品品质的提高,意味着价位水平相应提高,使菇农及经营者收入增加。此外,由于病害发生率下降,污染废料减少、药物使用减少,对栽培环境乃至环境的保护和可持续发展等有着不可估量的作用。食用菌菌种的脱毒有着良好的应用优势和应用效益,也有着广阔的发展前景。尤其是面对国际市场,食用菌产品要上档次,要提高质量水平,应用和推广菌种脱毒技术是有效的捷径,既符合国际性食品的绿色潮流,也符合广大菇农朋友的利益和要求。
(2)菌种脱毒技术
脱毒菌种生产技术的突出特点是投资不多,设备简单,操作容易。将食用菌尖端生长点进行脱毒,效果理想。具体的脱毒方法如下。
使用规格为90毫米或110毫米的培养皿,或者规格为25毫米x200毫米的大型试管。
 先按常规制备母种培养基,装入三角瓶,用棉塞封口,加牛皮纸包封,同时将培养皿洗净后用牛皮纸包好。二者同时进行灭菌处理。
 灭菌器内压力为零时,取出灭菌物,放入接种箱。打开牛皮纸包封,一手持培养皿,一手持三角瓶,利用手指调控使培养皿上盖开启约1-2厘米,倒入培养基液体10-20毫升,盖严。将培养皿平置,冷却后成一光滑平面,所称“平板”。
平板”冷却至30℃一下时,接入待脱毒菌种。接入方法:挑取米粒大小的一块种源,接入“平板”
边缘。接种后置于规定的温度下进行培养。当菌丝萌发至2厘米时,用尖刀接种工具切取菌丝尖1毫米左右,接入新制“平板”上。此为一次脱毒,根据情况一般连续脱毒5-10次基本可以脱去菌株所带的病毒。脱毒次数越多,脱毒效果就越有保证。
(3)制作扩大脱毒母种培养基的简易方法
 菇农在制作食用菌母种培养基时,一般要用到琼脂。但琼脂价格较高,有些地区还买不到,而且用琼脂来固化培养基,工序也较烦琐。为此,笔者为大家介绍集中简易母种培养基的制作方法。
 绿豆粉培养基。将新鲜、干燥、无毒变的绿豆粉放入锅内,加入适量的水煮沸,调成糊状,装入试管,装入量为试管容量的1/4-1/3,然后塞好棉塞,在15磅的压力下灭菌45分钟,取出后趁热摇散备用。
麦粒培养基。将小麦粒用温水泡2小时,捞出放入竹筛,每4小时淋浇1次清水。经约24小时,当麦粒萌发出0.50厘米长的小芽时,放入锅内煮透(煮沸半小时)取出沥干,均匀拌入1%的石膏粉,在装如试管,装入量为试管的1/3-1/2,塞好棉塞,在15磅压力下灭菌45分钟,取出后趁热摇散备用。
大米饭培养基。将大米除杂后淘洗干净,加入1%的糖,按常规煮成米饭。选用硬度大的饭粒,均匀拌入1%的米糠或干马粪,将米饭搓成粒状,在装入试管中,装入量为试管的1/3-1/2,塞好棉花,在15磅压力下灭菌45分钟。
玉米粒培养基。将玉米粒粉碎(或切碎)成绿豆大小,用水泡透,捞出沥干水分,拌入1%的碳酸钙粉晾散后装入试管,装入量为试管的1/3-1/2,塞好棉塞,在15磅压力下灭菌45分钟,取出后趁热摇散备用。
如果没有高压灭菌锅,可用家用高压锅蒸2小时或用普通锅蒸6小时灭菌,效果也很好。以上几种培养基适合做蘑菇、凤尾菇、平菇母种的培养基。
(4)食用菌灭菌新方法
取旧汽油桶一个(里面的残留要清洗干净),先用砖砌一个比桶高10厘米、比桶径宽10厘米的炉台,用10根16毫米粗、30厘米长的钢筋作为炉条,一侧留鼓风机风道。在桶壁的靠桶盖处焊1根钢管并装上阀门,以便加水和排污;在桶壁的另一面靠桶底处焊2根分管(上接黑胶管)排气;在桶盖的一侧上下各焊一根4厘米长的细钢管L形),中间接一根透明的塑料管作为水位计,然后将油桶卧放在炉台上。放置时注意桶盖向前,桶底向后,前低后高。靠桶底砌烟窗,尽量利用余热;两侧砌炉壁,以包住下半个油桶。这样一个简单的蒸汽发生器就成功了。
在灶台的一侧铺一块水泥地或铺2层薄膜(面积因料而定,上面铺砖或木料然后堆料,排气管放在料堆下面,盖上3-4层薄膜,四周用砖压好,然后开始烧火通气。通气时间为6-8小时,此后将料堆再闷一夜,然后接种。这样的炉灶做好能在菇棚里也砌一个,冬季只需将油桶搬到搬到棚里即可用蒸汽加温,一炉多用,生产任务紧时也可在炉台的另一侧在装一堆料,两堆料轮流灭菌,既省煤又省工省时,比土蒸锅方便、经济实用。
(5)如何防止食用菌菌种退化
 菌种退化会误导菌丝体生长缓慢,对环境、杂菌等的抵抗力变弱,子实体形成期提前或推后,出菇潮次不明显等现象。引起菌种退化的原因很多,其中菌种不纯和基因突变的主要原因,另外温度过高、不同菌株的混合栽培等都会引起菌种退化。
 防止菌种退化的措施有:保证菌种的纯培养,注意不要用杂菌污染的菌种,不要近距离相连接培养基;严格控制菌种传代次数,减少机械损伤,保证菌种活力;适当低温保存菌种,低温型菌种如蘑菇、香菇等,在4℃有利于保存菌丝体的活力,高温型菌种如草菇在16℃有利于保存菌丝体的活力;避免在单一培养基中多次传代;菌种不易过长时间使用,超龄菌种会出现老化,而老化与退化是有相连的,生活力弱的菌种很容易出现退化;菌种要定期进行复壮,在适温、合适酸碱度、充足养量、无杂菌培养等条件下进行;每年进行孢子分离,以有性繁殖来发现优良菌株,以组织分离来巩固优良菌株的遗传特性。
 

 
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